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使用深度學習方法高通量預測代謝酶的 kcat,或揭開細胞工廠秘密

來源:ScienceAI 瀏覽 1601 次 發(fā)布時間:2022-09-14

酶周轉(zhuǎn)數(shù)(kcat)是了解細胞代謝、蛋白質(zhì)組分配和生理多樣性的關(guān)鍵,但實驗測量的kcat數(shù)據(jù)往往稀疏且嘈雜。

查爾姆斯理工大學(Chalmers University of Technology)的研究團隊提供了一種深度學習方法(DLKcat),用于僅根據(jù)底物結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)序列對來自任何生物體的代謝酶進行高通量kcat預測。DLKcat可以捕獲突變酶的kcat變化并識別對kcat值有強烈影響的氨基酸殘基。研究人員應(yīng)用這種方法來預測300多種酵母物種的基因組規(guī)模kcat值。


此外,該團隊設(shè)計了一個貝葉斯管道,以根據(jù)預測的kcat值參數(shù)化酶約束的基因組規(guī)模代謝模型。由此產(chǎn)生的模型在預測表型和蛋白質(zhì)組方面優(yōu)于先前管道中相應(yīng)的原始酶約束基因組規(guī)模代謝模型,并使研究人員能夠解釋表型差異。DLKcat和酶約束的基因組規(guī)模代謝模型構(gòu)建管道是揭示酶動力學和生理多樣性的全球趨勢,并進一步闡明大規(guī)模細胞代謝的寶貴工具。


該研究以「Deep learning-based kcat prediction enables improved enzyme-constrained model reconstruction」為題,于2022年6月16日發(fā)布在《Nature Catalysis》。

酶轉(zhuǎn)換數(shù)(kcat)定義了反應(yīng)的最大化學轉(zhuǎn)化率,是了解特定生物體的新陳代謝、蛋白質(zhì)組分配、生長和生理學的關(guān)鍵參數(shù)。酶數(shù)據(jù)庫BRENDA和SABIO-RK中有大量可用的kcat值集合,然而,與現(xiàn)有的各種生物體和代謝酶相比,這些值仍然稀少,這主要是因為缺乏用于kcat測量的高通量方法。


此外,由于不同的測定條件(例如pH值、輔因子可用性和實驗方法),實驗測量的kcat值具有相當大的可變性??傊∈璧氖占拖喈敶蟮脑肼曄拗屏薻cat數(shù)據(jù)在全局分析中的使用,并可能掩蓋酶進化趨勢。


特別是酶約束的基因組規(guī)模代謝模型(ecGEM),其中全細胞代謝網(wǎng)絡(luò)受到酶催化能力的約束,因此能夠準確模擬最大生長能力、代謝變化和蛋白質(zhì)組分配,特別依賴于基因組-縮放kcat值。在過去的十年中,ecGEM(或遵循酶約束概念的模型)已分別針對幾種經(jīng)過充分研究的生物體開發(fā),包括大腸桿菌、釀酒酵母、中國倉鼠卵巢細胞和智人。由于kcat測量的局限性和依賴酶委員會(EC)編號注釋來搜索這些已開發(fā)管道中的kcat值,為研究較少的生物體重建ecGEM或為多種生物體進行大規(guī)模重建仍然是一個挑戰(zhàn)。


此外,即使對于那些經(jīng)過充分研究的生物,kcat的覆蓋范圍也遠未完成。在釀酒酵母ecGEM中,只有5%的酶促反應(yīng)在BRENDA中具有完全匹配的kcat值。當數(shù)據(jù)缺失時,以前的ecGEM重建流程通常假設(shè)kcat值來自類似的底物、反應(yīng)或其他生物,這可能導致模型預測偏離實驗觀察。明確要求獲得大規(guī)模的kcat值以提高模型準確性并產(chǎn)生更可靠的表型模擬。


深度學習已被應(yīng)用并在模擬化學空間、基因表達、酶相關(guān)參數(shù)(如酶親和力和EC數(shù))方面表現(xiàn)出出色的性能。此前,有研究人員采用機器學習方法,根據(jù)從蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中獲得的平均代謝通量和催化位點等特征來預測大腸桿菌kcat值。然而,這些特征通常很難獲得,這使得這種方法只能應(yīng)用于研究最充分的生物體,如大腸桿菌。


在這里,查爾姆斯理工大學(Chalmers University of Technology)的研究團隊提出了深度學習方法DLKcat來預測所有代謝酶與其底物的kcat值,只需要底物SMILES信息和酶的蛋白質(zhì)序列作為輸入,從而為任何物種產(chǎn)生通用的kcat預測工具。

圖示:用于ecGEM參數(shù)化的kcat深度學習。(來源:論文)


DLKcat可以捕獲kcat向精確的單個氨基酸替代方向的變化,從而能夠計算注意力權(quán)重,從而識別對酶活性產(chǎn)生重大影響的氨基酸殘基。氨基酸取代是酶進化領(lǐng)域的一項強大技術(shù),通常用于探測酶催化機制。特別是,大多數(shù)替代實驗在底物結(jié)合位點區(qū)域進行誘變,因為假設(shè)結(jié)合區(qū)域?qū)Υ呋钚援a(chǎn)生很大影響。然而,據(jù)報道,偏遠地區(qū)會對催化活性產(chǎn)生深遠影響。


研究人員不僅確定了人PNP酶肌苷結(jié)合區(qū)域中氨基酸殘基的高關(guān)注權(quán)重,而且還確定了具有高關(guān)注權(quán)重的各種非結(jié)合殘基位點,這表明這些殘基也可能對催化活性產(chǎn)生重大影響,值得進一步驗證。DLKcat因此可以作為蛋白質(zhì)工程工具箱的重要組成部分。


預測的基因組規(guī)模的kcat譜可以促進酶約束代謝模型的重建,從策劃和自動生成的基本(非ec)GEM中。事實證明,深度學習預測的kcat過程比匹配來自BRENDA和SABIO-RK數(shù)據(jù)庫的體外kcat值更全面但仍然實用;這在GECKO和MOMENT等原始ecGEM重建管道中很常見。


通過不依賴EC編號注釋,DLKcat還能夠預測同工酶特異性kcat值,而SMILES的使用避免了原始ecGEM重建管道可能遇到的GEM和BRENDA之間底物命名不統(tǒng)一的問題。隨后可以通過貝葉斯方法將DL-ecGEM調(diào)整為現(xiàn)有的實驗生長數(shù)據(jù),該方法產(chǎn)生具有生理相關(guān)解空間的后均值ecGEM。結(jié)合起來,當前基于DLKcat的管道因此適用于幾乎任何生物體的ecGEM重建,其中蛋白質(zhì)序列FASTA文件和基本GEM可用。他們的管道因此提高了適用性,與以前構(gòu)建的原始ecGEM相比,它甚至提高了具有酶促約束的反應(yīng)數(shù)量。

圖示:kcat預測的深度學習模型性能。(來源:論文)


盡管基于DLKcat的管道產(chǎn)生的ecGEM性能優(yōu)于原始ecGEM,但仍然存在各種挑戰(zhàn)。例如,雖然深度學習模型可以將混雜酶的替代物與隨機選擇的底物區(qū)分開來,但它仍然預測了可能過高的隨機底物的動力學活性水平。


這種行為可以通過負面數(shù)據(jù)的有限可用性來解釋:酶-底物對沒有產(chǎn)生催化作用的情況。增加對陰性數(shù)據(jù)集的報告,其中酶-底物對的未檢測到的活性由酶數(shù)據(jù)庫報告和收集,可以增強未來深度學習模型在定義真陰性方面的能力。


此外,DLKcat并未考慮pH和溫度等環(huán)境因素的影響,但將DLKcat與其他新興機器學習工具(例如酶的最佳溫度預測)相結(jié)合,將有助于未來研究環(huán)境參數(shù)對酶活性的影響。


另一個挑戰(zhàn)涉及涉及多種底物和由異聚酶復合物催化的反應(yīng)??梢詾榇祟惙磻?yīng)定義的多底物SMILES和蛋白質(zhì)序列都可以與DLKcat一起發(fā)揮作用,從而為一個反應(yīng)產(chǎn)生多個預測的kcat值。目前在這些情況下,研究人員會選擇最大kcat值,但最好設(shè)計一種方法來預測每種多底物和異聚酶的一個kcat值。

圖示:用于預測和解釋突變酶kcat的深度學習模型。(來源:論文)


此外,DLKcat衍生的DL-ecGEM和后驗均值ecGEM繼承了基本GEM的局限性,其中基于約束的建模的核心穩(wěn)態(tài)假設(shè)允許人們確定代謝通量,但不容易考慮調(diào)節(jié)行為。雖然ecGEM極大地將基于約束的模型的解空間減少到細胞可行容量,但kcat并不是決定反應(yīng)速率的唯一動力學參數(shù),例如,親和常數(shù)起著重要的作用。然而,由于基于約束的模型無法預測內(nèi)部代謝物濃度,因此目前無法輕易考慮這些參數(shù)的影響。


盡管如此,kcat值也是其他資源分配模型中的重要參數(shù),例如蛋白質(zhì)組約束的GEM和代謝/大分子表達模型。盡管改進的預測和更多的應(yīng)用,如何定義kcat值也仍然是重建這些模型的挑戰(zhàn)。這種資源分配模型和ecGEM都認為細胞需要將其有限的蛋白質(zhì)組分配到不同的途徑以實現(xiàn)更快的生長或更好的適應(yīng)度,而每個反應(yīng)的蛋白質(zhì)組成本同樣由酶的通量和動力學速率定義。


因此,這些模型的代謝部分的深度學習預測kcat值可以提高其質(zhì)量和性能,盡管無法從DLKcat獲得在這些模型公式中確定的其他具有挑戰(zhàn)性的動力學參數(shù),例如核糖體催化率。此外,特別關(guān)注描述酶動力學的模型公式可以受益于深度學習預測的kcat值,因此DLKcat方法可以在建模領(lǐng)域找到廣泛的應(yīng)用。


總之,DLKcat產(chǎn)生了現(xiàn)實的kcat值,可用于指導未來的基因工程、了解酶進化和重建ecGEM以預測代謝通量和表型。除此之外,這種基于深度學習的kcat預測工具的許多其他潛在用途,例如基因組挖掘和全基因組關(guān)聯(lián)研究分析中的工具。開發(fā)的自動貝葉斯ecGEM重建管道將有助于進一步用于ecGEM重建,用于組學數(shù)據(jù)合并和分析。


論文鏈接:https://www.nature.com/articles/s41929-022-00798-z

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